心肌细胞原代分离及培养

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原代细胞培养常见问题

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脂质体介导转染，将目的基因导入细胞48小时后，目的基因即在细胞内表达。此时为了建立稳定细胞系

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细胞培养技术在生物研究领域内是必不可少的核心环节,在培养过程中面临的一个严重问题就是细胞污染,其中支原体是最主要的污染源。

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可以通过测定线粒体酶活性或细胞膜完整性进行评估，并由总细胞中活细胞所占的百分比来衡量。

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稳定转染或持久的转染是用于建立克隆的细胞系，这种细胞系中转染的目的基因整合到染色体DNA中并指导适量目的蛋白的合成。一般来说（由细胞类型决定），形成稳定转染细胞的效率比瞬时转染的效率低1到2个数量级。

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平板克隆形成试验可检测贴壁细胞细胞的克隆形成能力,软琼脂集落形成试验可检测非锚着依赖生长的细胞,如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系等。

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IOS基因过表达/超高表达稳转细胞系构建1. 多位点整合，非随机整合；2. 每一个位点都是高表达位点；3. 稳定遗传，传代过程中，基因不会丢失；4. 基因大小不影响整合的效率；

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